Clathrin Light Chain B/CLTB Double Nickaseプラスミド (h): sc-404228-NIC

CLTBはクラスリン軽鎖B（clathrin light chain B）をコードしており、エンドサイトーシスおよびゴルジ体以降（ポストゴルジ）輸送において、クラスリン格子の組み立てと湾曲を制御するクラスリン被覆小胞の中核構成要素である。被覆ピットのダイナミクスやアダプターとの相互作用を調節することで、CLTBは受容体の取り込み、シナプス小胞サイクル、ならびにエンドソーム経路全体にわたる膜タンパク質の選別に寄与する。クラスリン介在性輸送はシグナル伝達や栄養取り込みに影響し、CLTB依存的な小胞輸送を細胞恒常性およびストレス応答と結び付けている。エンドサイトーシス輸送や被覆小胞機能の破綻は、がん生物学、神経生物学、宿主—病原体相互作用に関与することが示唆されており、CLTBは膜輸送の機構研究における有用な解析ノードとなる。

Clathrin Light Chain B/CLTB ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CLTB 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CLTB内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CLTBの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CLTBが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。