Clathrin Heavy Chain/CLTC Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400863-NIC

CLTC codifica a cadeia pesada da clatrina, um componente estrutural central das invaginações e vesículas revestidas por clatrina que medeia a internalização de receptores e o tráfego de membranas entre a membrana plasmática, endossomos e a rede trans-Golgi. Ao se montar em redes poliédricas com proteínas adaptadoras, o CLTC coordena a seleção de carga e o brotamento de vesículas, sustentando a endocitose, a reciclagem de vesículas sinápticas e a renovação regulada de receptores de sinalização. Esses processos se cruzam com vias que controlam a sinalização por fatores de crescimento, a captação de nutrientes e a homeostase de organelas. O transporte mediado por clatrina desregulado tem sido associado a alterações na sinalização de receptores e a rearranjos genômicos envolvendo o CLTC em algumas neoplasias, tornando o CLTC um nó útil para estudar fenótipos dependentes de tráfego em células humanas.

Clathrin Heavy Chain/CLTC O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CLTC em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CLTC. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CLTC. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CLTC interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.