Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Clathrin Heavy Chain/CLTC Double Nickase Plasmid (h): sc-400863-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Clathrin Heavy Chain/CLTC Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Clathrin Heavy Chain/CLTC Double-Nickase-Plasmid (h) und Clathrin Heavy Chain/CLTC Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CLTC abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Clathrin Heavy Chain/CLTC: sc-12734
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Clathrin Heavy Chain/CLTC Double Nickase Plasmid (h) | sc-400863-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Clathrin Heavy Chain/CLTC Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400863-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CLTC kodiert die schwere Kette von Clathrin, eine zentrale Strukturkomponente clathrinbeschichteter Gruben und Vesikel, die die Rezeptorinternalisierung und den Membrantransport zwischen der Plasmamembran, Endosomen und dem trans-Golgi-Netzwerk vermittelt. Durch die Assemblierung zu polyedrischen Gittern zusammen mit Adapterproteinen koordiniert CLTC die Auswahl der Fracht und das Abschnüren von Vesikeln und unterstützt damit die Endozytose, das Recycling synaptischer Vesikel sowie den regulierten Abbau von Signalrezeptoren. Diese Prozesse greifen in Signalwege ein, die Wachstumsfaktorsignale, Nährstoffaufnahme und die Homöostase von Organellen steuern. Eine fehlregulierte clathrinvermittelte Transportmaschinerie wurde mit veränderter Rezeptorsignalisierung und genomischen Umlagerungen unter Beteiligung von CLTC bei bestimmten Malignomen in Verbindung gebracht, was CLTC zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung trafficking-abhängiger Phänotypen in menschlichen Zellen macht.
Clathrin Heavy Chain/CLTC Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CLTC-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CLTC abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CLTC-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CLTC-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.