CKR-7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402150-ACT

O CCR7 humano codifica o receptor de quimiocinas CKR-7, um receptor acoplado à proteína G que se liga a CCL19 e CCL21 para regular a migração dirigida de células T, células dendríticas e outros subgrupos de leucócitos. A sinalização conduzida por CCR7 coordena quimiotaxia, adesão e remodelação do citoesqueleto por meio de vias que incluem MAPK/ERK, PI3K–AKT e GTPases da família Rho, sustentando a organização dos tecidos linfoides e a vigilância imunológica. A expressão desregulada de CCR7 tem sido associada a alterações no tráfego inflamatório e a padrões de disseminação metastática em múltiplas neoplasias, nas quais gradientes de quimiocinas influenciam o direcionamento (“homing”) de células tumorais. Como resultado, o CCR7 é amplamente estudado em modelos de posicionamento de células imunes, dinâmica de apresentação de antígenos e programas de migração guiados pelo microambiente.

CKR-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CCR7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CKR-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CCR7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CCR7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CKR-7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CCR7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CKR-7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CKR-7 em células tumorais com expressão de CCR7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.