CIITA Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m2): sc-419390-LAC-2

O gene Ciita de camundongo codifica o transativador do complexo principal de histocompatibilidade de classe II (CIITA), um regulador mestre que não se liga diretamente ao DNA e que coordena a transcrição de genes do MHC de classe II e de fatores acessórios de apresentação de antígenos por meio de interações com o enhanceossomo RFX, NF-Y e CREB/ATF. A atividade de CIITA governa a apresentação de antígenos induzível em células apresentadoras de antígeno profissionais e pode ser estimulada por sinalização de citocinas, como o IFN-γ, conectando sinais da imunidade inata a respostas adaptativas de células T CD4+. A desregulação da função de Ciita/CIITA está associada a alterações na expressão do MHC de classe II e a fenótipos imunológicos relevantes para infecção, autoimunidade e vigilância imune contra tumores em modelos murinos. A edição do gene Ciita e estudos de perturbação focados em CIITA dão suporte a pesquisas mecanísticas sobre vias de apresentação de antígenos, controle epigenético da transcrição de genes imunológicos e triagens de genômica funcional em imunologia e inflamação.

As Partículas de Ativação Lentivirais CIITA (m2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Ciita numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais CIITA (m2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Ciita, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de CIITA. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Ciita e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.