CHTOP Double Nickaseプラスミド (h): sc-411874-NIC

CHTOP（chromatin target of PRMT1）は保存性の高い核内タンパク質であり、メッセンジャーリボヌクレオタンパク質（mRNP）の組み立てやmRNAの核外輸送に関与することで、転写産物の出力をRNAプロセシングと結び付けている。CHTOPはTREX複合体や他のRNA結合因子と相互作用し、転写共役的スプライシング、poly(A)+ RNAの成熟、核—細胞質間輸送を支えることで、クロマチン上で起こる事象を遺伝子発現プログラムへと連結する。RNA代謝およびエピジェネティクス関連ネットワークの制御を介して、CHTOPは転写や輸送の変化が細胞ストレス応答や異常増殖に寄与する状況において研究されてきた。CHTOP関連経路の破綻は疾患に関連する複数のモデルで報告されており、RNAプロセシングとゲノム制御の機構研究における有用な標的となっている。

CHTOP ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CHTOP 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CHTOP内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CHTOPの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CHTOPが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。