ChREBP Double Nickaseプラスミド (h): sc-401803-NIC

MLXIPLは、糖質応答性エレメント結合タンパク質（ChREBP）をコードしており、ChREBPはグルコースに応答する転写因子として、糖質の利用可能性を脂質合成系および解糖系遺伝子の発現と結び付けます。代謝シグナルに応じて、ChREBPはMLXなどの補助因子と協調し、糖質応答性エレメントを含むプロモーターを制御することで、栄養素センシングと肝臓・脂肪組織の代謝を司る転写制御を統合します。この調節軸は、de novo脂肪合成、トリグリセリド合成、ならびにグルコース恒常性を制御する経路に寄与し、栄養過剰条件下での代謝リモデリングとChREBP活性を結び付けます。MLXIPL/ChREBPシグナルの異常は、インスリン抵抗性、脂肪肝表現型、さらに広範な心代謝疾患の機序と関連づけられており、代謝関連遺伝子ネットワークを研究するうえで重要なノードとなります。

ChREBP ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MLXIPL 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MLXIPL内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MLXIPLの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MLXIPLが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。