ChemR23 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-403033-LAC

CMKLR1 codifica o ChemR23, um receptor acoplado à proteína G expresso em múltiplas populações de células imunes, que reconhece o quimioatraente chemerina (RARRES2) e ligantes relacionados para regular a migração direcional e a sinalização inflamatória. A ativação do ChemR23 aciona vias canônicas de GPCR, incluindo a inibição dependente de Gαi do cAMP e a sinalização downstream de MAPK/ERK e PI3K/AKT, que modulam a produção de citocinas, o tráfego de leucócitos e a vigilância imune tecidual. Além da chemerina, o ChemR23 pode responder a mediadores lipídicos pró-resolução especializados, como a resolvina E1, conectando-o a programas que coordenam a inflamação e sua resolução. A desregulação da sinalização CMKLR1/ChemR23 tem sido associada a estados inflamatórios crônicos e disfunção metabólica, tornando-o um ponto útil para estudar a comunicação cruzada imuno-metabólica e a regulação de circuitos inflamatórios.

As Partículas de Ativação Lentivirais ChemR23 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de CMKLR1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais ChemR23 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição CMKLR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de ChemR23. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo CMKLR1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.