CHD8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-426734

概要

Chd8 はクロモドメイン・ヘリカーゼ DNA 結合タンパク質 8（CHD8）をコードしており、発生過程におけるヌクレオソーム配置と転写プログラムを制御する ATP 依存性のクロマチンリモデラーです。CHD8 はエンハンサーおよびプロモーターのアクセス性に影響を与え、クロマチン構造を細胞周期制御、神経分化、ならびに Wnt/β-カテニン関連の転写出力と結び付けます。マウス系では、CHD8 の発現量（ドーズ）の変動が遺伝学的・機能的研究において自閉スペクトラム症（ASD）関連の生物学と結び付けられていることから、Chd8 は神経発生機構や遺伝子制御ネットワークを解析するために広く用いられています。これらの特性により、CHD8 は系譜決定と転写恒常性に対するクロマチン介在的制御を研究するうえでの重要な結節点となります。

CHD8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるChd8遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Chd8内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Chd8のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CHD8タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CHD8シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Chd8欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CHD8の機能に不可欠なChd8エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Chd8ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CHD8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCHD8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Chd8遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CHD8 HDRプラスミド（m）および CHD8 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはChd8ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のChd8標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。