CHD8 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-426734

Panoramica

Chd8 codifica la proteina 8 legante il DNA con dominio cromodominio ed elicasi (CHD8), un rimodellatore della cromatina ATP-dipendente che regola il posizionamento dei nucleosomi e i programmi trascrizionali durante lo sviluppo. CHD8 influenza l’accessibilità di enhancer e promotori, collegando l’architettura della cromatina al controllo del ciclo cellulare, alla differenziazione neuronale e agli output trascrizionali associati alla via Wnt/β-catenina. Nei sistemi murini, Chd8 è ampiamente utilizzato per indagare i meccanismi del neurosviluppo e le reti di regolazione genica, poiché alterazioni del dosaggio di CHD8 sono state collegate alla biologia associata ai disturbi dello spettro autistico in studi genetici e funzionali. Queste caratteristiche rendono CHD8 un nodo chiave per studiare il controllo della specificazione di linea e dell’omeostasi trascrizionale mediato dalla cromatina.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CHD8 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Chd8 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Chd8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Chd8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CHD8.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Chd8 per lo studio della segnalazione di CHD8, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Chd8 critici per la funzione di CHD8
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Chd8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CHD8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CHD8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Chd8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CHD8 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CHD8 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Chd8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Chd8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.