CHD7 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404017-ACT

CHD7（chromodomain helicase DNA binding protein 7）はATP依存性のクロマチンリモデラーであり、クロモドメインを介してヒストン修飾マークを読み取り、エンハンサーおよびプロモーターのアクセス性を制御します。ヒト細胞では、CHD7はヌクレオソーム配置と高次クロマチン構造を調節することで、系譜決定、神経堤の発生、器官形成を形作る転写プログラムを統合的に制御します。CHD7の機能は主要なエピジェネティック制御および転写制御経路と交差し、分化過程におけるRNAポリメラーゼII依存的な遺伝子発現やクロマチン状態の遷移に影響を与えます。CHD7の遺伝子破綻や発現量（用量）の変化は、CHARGE症候群を含む発達障害の表現型と関連しており、その制御異常は神経発達およびがん関連の転写ネットワークにおいても研究されています。

CHD7 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CHD7の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CHD7 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CHD7 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCHD7転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CHD7の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCHD7遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCHD7依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCHD7発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCHD7経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。