Plásmido CRISPR de Activación (h) CHAC1: sc-403197-ACT

CHAC1 (ChaC glutathione-specific gamma-glutamylcyclotransferase 1) es una enzima inducible por estrés que degrada el glutatión, vinculando la homeostasis redox con el metabolismo de aminoácidos y la adaptación celular al estrés oxidativo y del retículo endoplásmico. Como efector aguas abajo de la respuesta integrada al estrés impulsada por ATF4, CHAC1 influye en el equilibrio de especies reactivas de oxígeno, la capacidad de plegamiento proteico y la susceptibilidad a programas de destino celular asociados al estrés. Se ha informado de una expresión alterada de CHAC1 en distintos contextos que implican estrés metabólico e inflamación, incluyendo la biología del cáncer y modelos de enfermedades neurodegenerativas, donde con frecuencia se investigan el agotamiento de glutatión y las vías relacionadas con la ferroptosis. Modular CHAC1 ofrece un enfoque manejable para estudiar cómo el recambio de glutatión reconfigura redes de señalización, la función mitocondrial y programas transcripcionales sensibles al estrés en células humanas.

CHAC1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CHAC1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CHAC1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CHAC1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CHAC1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CHAC1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CHAC1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CHAC1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CHAC1 en células tumorales con expresión de CHAC1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.