CH25H CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402849-ACT

ヒトCH25Hは、コレステロールを25-ヒドロキシコレステロールへと変換する、小胞体関連酵素であるコレステロール25-ヒドロキシラーゼをコードする。25-ヒドロキシコレステロールは、ステロール恒常性および自然免疫シグナル伝達を調節するオキシステロールである。CH25H活性は、SREBP駆動の代謝制御を含むコレステロール生合成・輸送プログラムと連動し、さらに脂質を介した炎症性遺伝子発現制御の下流にも影響を及ぼす。骨髄系および上皮の文脈でインターフェロン誘導性因子として働くCH25Hは、宿主―病原体相互作用やサイトカイン応答の制御との関連が示されている。CH25H／25-ヒドロキシコレステロールのシグナル伝達の破綻は、代謝性炎症、動脈硬化関連経路、ならびに感染や自己免疫様表現型で観察される免疫攪乱の研究において重要である。

CH25H CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CH25Hの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CH25H CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CH25H 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCH25H転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CH25Hの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCH25H遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCH25H依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCH25H発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCH25H経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。