cGAS CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403354-ACT

ヒトMB21D1は、細胞質DNAセンサーである環状GMP-AMP合成酵素（cGAS）をコードしており、2′3′-cGAMPの合成を触媒することでSTING（TMEM173）シグナル伝達を誘導し、下流のTBK1–IRF3およびNF-κBを活性化します。この経路は、病原体由来DNAや本来あるべき場所から逸脱した自己DNAに応答して、I型インターフェロンおよび炎症性の転写プログラムを統合的に制御し、自然免疫をDNA損傷応答やミトコンドリアストレスと結び付けます。cGAS–STING活性の制御異常は、自己炎症性表現型、がんや細胞老化における異常な炎症シグナル、ならびにDNAウイルスに対する応答の変化と関連付けられており、MB21D1は免疫監視と無菌性炎症を研究するうえで重要な結節点となります。さらにcGASは、クロマチン関連プロセスや微小核（micronuclei）の検知にも影響し、ゲノム不安定性に駆動される免疫活性化の機構研究を支えます。

cGAS CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MB21D1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

cGAS CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MB21D1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMB21D1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性cGASの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMB21D1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるcGAS依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMB21D1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるcGAS経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。