CEP55 Lentiviral Activation Particles (h): sc-417522-LAC

Humanes CEP55 (zentrosomales Protein 55) ist ein zellzyklusregulierter Faktor, der sich während der späten Mitose an Zentrosomen und am Midbody anreichert, wo er die zytokinetische Abszission und die erfolgreiche Trennung der Tochterzellen koordiniert. CEP55 ist an der Organisation des Midbodys sowie an ESCRT-abhängigen Membranabschnürungsprozessen beteiligt und verknüpft damit die Dynamik des mitotischen Spindelapparats mit dem Abschluss der Zellteilung. Eine fehlregulierte CEP55-Expression ist häufig mit aberranter Proliferation, chromosomaler Instabilität und veränderter Zellzyklusprogression assoziiert, was CEP55 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der Mitosekontrolle bei Krebs und in anderen hyperproliferativen Kontexten macht. Darüber hinaus können CEP55-abhängige Veränderungen Signalnetzwerke beeinflussen, die die Zentrosomenfunktion mit Genomerhalt und zellulären Stressantworten koppeln.

CEP55 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente CEP55-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

CEP55 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der CEP55-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen CEP55-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen CEP55-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.