CEMIP CRISPR Activationプラスミド (h): sc-412779-ACT

CEMIP（cell migration-inducing hyaluronidase 1）は、分泌型および細胞内のヒアルロン酸結合タンパク質をコードしており、ヒアルロン酸の脱重合と代謝回転を促進することで細胞外マトリックス（ECM）のリモデリングを調節します。ヒアルロン酸代謝の制御を通じて、CEMIPは細胞接着、運動性、間質との相互作用に影響を及ぼし、マトリックス動態を、EMT関連プログラムや炎症性微小環境応答などのシグナル伝達過程と結び付けます。CEMIP発現の変化は、複数のがん種における腫瘍進行、浸潤、転移能と関連していることが報告されており、またマトリックス恒常性への作用を介して、結合組織や軟骨に関わる病態生理にも関与すると考えられています。これらの特性により、CEMIPは、ヒトモデル系においてECM駆動性の細胞挙動制御、組織リモデリング、疾患関連フェノタイプを研究するための有用な標的となります。

CEMIP CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CEMIPの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CEMIP CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CEMIP 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCEMIP転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CEMIPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCEMIP遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCEMIP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCEMIP発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCEMIP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。