CELSR1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405564-ACT

CELSR1（cadherin EGF LAG seven-pass G-type receptor 1）は、平面細胞極性（PCP）機構の中核構成要素として機能する非典型的な接着型GPCRをコードします。細胞外のカドヘリンリピートと細胞内のシグナル伝達インターフェースを介して、CELSR1は発生および組織リモデリングの過程で、方向性のある細胞挙動、上皮組織化、ならびに極性化した細胞骨格ダイナミクスを統合的に制御します。非カノニカルWNT/PCPシグナル伝達と機能的に交差し、VANGLやFZDなどのタンパク質と協調して、配向性細胞分裂や集団遊走を調節します。CELSR1の活性または発現の破綻は、発生異常や異常な組織パターニングと関連づけられており、PCPシグナルの変調は、浸潤、形態形成、バリア機能の維持といった文脈でしばしば研究されています。

CELSR1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CELSR1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CELSR1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CELSR1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCELSR1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CELSR1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCELSR1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCELSR1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCELSR1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCELSR1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。