Cdx2 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-419618-ACT

Cdx2（caudal type homeobox 2）は、胚発生の過程で体の後方パターン形成を確立・維持するホメオボックス型転写因子をコードしており、マウスでは栄養外胚葉の運命決定および腸上皮の分化における主要な制御因子です。CDX2は配列特異的なDNAモチーフに結合することで、Wnt/β-カテニンシグナル、上皮の極性、系譜決定と連動する転写プログラムを統括し、腸上皮の増殖と成熟に影響を与えます。CDX2発現の異常は、分化状態の変化や上皮としてのアイデンティティの破綻と関連づけられており、発生異常や消化管疾患の生物学を研究する上で、広く用いられるマーカーであると同時に、機序解明の重要な結節点でもあります。in vitroでは、Cdx2は幹細胞・前駆細胞系における運命転換のモデル化、オルガノイドの成熟、転写ネットワーク動態の解析にしばしば活用されています。

Cdx2 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Cdx2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Cdx2 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Cdx2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCdx2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Cdx2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCdx2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCdx2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCdx2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCdx2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。