Cdx2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401220-ACT

CDX2 codifica o fator de transcrição homeobox do tipo caudal Cdx2, um regulador-chave do desenvolvimento intestinal, da diferenciação epitelial e da manutenção de programas de padronização anteroposterior. O Cdx2 controla redes gênicas envolvidas na especificação do destino celular, na função de barreira e em programas transcricionais restritos a linhagens em tecidos gastrointestinais, integrando-se a contextos de sinalização associados a Wnt/β-catenina, BMP e Notch. A expressão desregulada de CDX2 ou alterações no circuito transcricional dependente de CDX2 têm sido associadas a estados de diferenciação aberrantes e a patologias gastrointestinais, e ele é amplamente utilizado como marcador de identidade de linhagem intestinal em sistemas modelo humanos. Como um fator de ligação ao DNA específico de sequência, o Cdx2 oferece um ponto acessível para dissecar o uso de enhancers, transições de estado da cromatina e a remodelação de redes transcricionais durante a plasticidade epitelial.

Cdx2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CDX2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Cdx2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CDX2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CDX2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Cdx2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CDX2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Cdx2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Cdx2 em células tumorais com expressão de CDX2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.