CDw75/ST6GAL1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402881-ACT

ST6GAL1 (CDw75) codifica uma sialiltransferase β-galactosídeo α2,6 residente no Golgi, que adiciona ácido siálico ligado em α2,6 a N-glicanos, moldando a composição de glicoproteínas na superfície celular e a função de receptores. Ao modular interações dependentes de glicanos, a ST6GAL1 influencia o tráfego de proteínas, o reconhecimento imune e os outputs de sinalização ligados a vias de adesão e sobrevivência. Alterações na atividade da ST6GAL1 e nos padrões de α2,6-sialilação têm sido associadas a diferenciação desregulada, sinalização inflamatória e fenótipos de glicosilação associados a tumores. Em sistemas modelo humanos, a ST6GAL1 é amplamente estudada pelo seu impacto na ligação a lectinas, em epítopos CDw75 associados a células B e na regulação de receptores dependente de glicosilação.

CDw75/ST6GAL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ST6GAL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CDw75/ST6GAL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ST6GAL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ST6GAL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CDw75/ST6GAL1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ST6GAL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CDw75/ST6GAL1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CDw75/ST6GAL1 em células tumorais com expressão de ST6GAL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.