CDKN2B/p15 INK4B Double Nickaseプラスミド (h): sc-400570-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- CDKN2B/p15 INK4B Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- CDKN2B/p15 INK4Bダブルニカースプラスミド（h）およびCDKN2B/p15 INK4Bダブルニカースプラスミド（h2）は、CDKN2Bを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: CDKN2B/p15 INK4B 抗体 (D-12): sc-271791
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
CDKN2B/p15 INK4B Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400570-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CDKN2B/p15 INK4B Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400570-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDKN2B は、サイクリン依存性キナーゼ阻害因子である p15^INK4B をコードしており、CDK4/6 に結合して RB のリン酸化を抑制し、G1/S チェックポイントを維持します。細胞周期制御の中核として、CDKN2B は TGF-β/SMAD などの増殖抑制経路からのシグナルや、不適切な増殖を抑えるより広範な細胞老化プログラムを統合します。9p21 における欠失、プロモーターのメチル化、あるいは座位の破綻など、CDKN2B の制御異常は、多様ながんで増殖制御の喪失や異常増殖に関連する表現型としばしば結び付いています。こうした生物学的背景により、CDKN2B はチェックポイント維持、老化回避、ならびに CDK4/6–RB シグナルへ収束する経路間相互作用を研究するうえで有用な標的となります。
CDKN2B/p15 INK4B ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CDKN2B 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CDKN2B内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CDKN2Bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CDKN2Bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。