CDKN2A/p16 Double Nickaseプラスミド (m): sc-419610-NIC

マウスのCdkn2aは、サイクリン依存性キナーゼ阻害因子であるCDKN2A/p16をコードしており、CDK4/6の活性を抑制して、RB依存的なG1/S細胞周期チェックポイントの制御維持に寄与します。RBファミリータンパク質のリン酸化を制限することで、p16は増殖停止プログラムを統合的に調整し、がん遺伝子性ストレスや組織損傷に応答した老化関連シグナルとも連携します。Cdkn2aの制御は、細胞老化、幹細胞・前駆細胞の増殖、ならびにチェックポイントの完全性を司る経路と密接に結び付いています。Cdkn2a/p16の発現や機能の変化は、マウスモデルにおいて、細胞老化、腫瘍抑制経路の活性化、および細胞周期異常を評価する分子指標として広く用いられています。

CDKN2A/p16 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Cdkn2a 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Cdkn2a内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Cdkn2aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Cdkn2aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。