Cdk9 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400242-ACT

ヒトCDK9は、シクリン依存性キナーゼ9（Cdk9）をコードしている。Cdk9は、RNAポリメラーゼIIのC末端ドメインをリン酸化して生産的な転写伸長を促進する、ポジティブ転写伸長因子b（P-TEFb）の触媒サブユニットである。プロモーター近傍でのポーズ解除の制御を通じて、Cdk9は即時早期遺伝子、ストレス応答プログラム、細胞周期および生存制御因子の発現を協調させ、転写コアクチベーターやクロマチン関連因子からのシグナルを統合する。CDK9活性は、転写に共役した事象を形作り、遺伝子発現の速度論を制御することで、RNAプロセシングとゲノム安定性にも影響を及ぼす。CDK9/P-TEFbシグナルの破綻は、がん生物学、炎症シグナル、ウイルス―宿主間の転写制御に関わる異常な転写依存性としばしば関連しており、転写機構の研究において広く用いられる解析対象（ノード）となっている。

Cdk9 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CDK9の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Cdk9 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CDK9 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCDK9転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Cdk9の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCDK9遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCdk9依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCDK9発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCdk9経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。