Cdk5 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-419602-ACT

サイクリン依存性キナーゼ5（Cdk5）は、プロリン指向性のセリン／スレオニンキナーゼであり、細胞周期CDKとは異なり、主として分裂後細胞においてp35/p39との会合を介して活性化され、神経系の発生と機能を制御する。マウスではCdk5が、微小管の安定性、エンドサイトーシス、転写応答を調節する基質をリン酸化することで、細胞骨格ダイナミクス、軸索ガイダンス、シナプス小胞輸送、活動依存的シグナル伝達を制御する。さらに、カルシウムシグナル、キナーゼカスケード、プロテオスタシスを司る経路と交差し、神経細胞の形態やネットワーク可塑性を形作るためのシグナルを統合する。Cdk5活性の破綻は、神経変性、神経炎症、神経精神疾患様の表現型に関わる機序と関連づけられており、神経細胞のストレス応答や回路レベルの機能不全を研究する上で、頻繁に標的とされている。

Cdk5 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Cdk5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Cdk5 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Cdk5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCdk5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Cdk5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCdk5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCdk5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCdk5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCdk5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。