Cdk4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400148-ACT

ヒトCDK4はサイクリン依存性キナーゼ4（Cdk4）をコードしており、G1期進行の中核的な制御因子である。Cdk4はD型サイクリンと複合体を形成してRBファミリータンパク質をリン酸化し、S期への進入に必要なE2F依存性転写を促進する。CDK4活性は、受容体型チロシンキナーゼ–RAS–MAPK系やPI3K–AKT系などの有糸分裂促進性シグナル伝達経路と統合されており、CDKN2A（p16INK4A）などのCDK阻害因子によっても調節される。CDK4シグナルの異常は細胞周期チェックポイント制御を乱し、がん生物学に関連する異常増殖プログラムに寄与する一方で、増殖細胞における系譜決定や代謝リモデリングにも影響を与える。サイクリンD–CDK4/6–RB経路における結節的キナーゼとして、CDK4は増殖制御や細胞周期と転写のカップリングを解析するための分子ツールとして広く用いられている。

Cdk4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CDK4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Cdk4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CDK4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCDK4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Cdk4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCDK4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCdk4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCDK4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCdk4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。