Cdc7 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419586

Panoramica

Cdc7 (cell division cycle 7) codifica una chinasi serina/treonina che funge da subunità catalitica del complesso DDK, un regolatore chiave dell’avvio della replicazione del DNA. Cdc7 fosforila componenti dell’elicasi MCM per promuovere l’attivazione delle origini di replicazione e coordinare la progressione della fase S con il controllo dei checkpoint, integrando i segnali provenienti dalle vie di risposta allo stress replicativo. Attraverso i suoi ruoli nella duplicazione del genoma e nella stabilità delle forcelle di replicazione, l’attività di Cdc7 influenza l’integrità cromosomica e la dinamica del ciclo cellulare nei tessuti proliferativi. Una segnalazione di Cdc7 deregolata è stata associata a fenotipi di proliferazione aberrante e instabilità genomica, frequentemente studiati nella biologia del cancro e nella ricerca sulla risposta al danno al DNA.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Cdc7 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cdc7 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cdc7 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cdc7 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Cdc7.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cdc7 per lo studio della segnalazione di Cdc7, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cdc7 critici per la funzione di Cdc7
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cdc7 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Cdc7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Cdc7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cdc7. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Cdc7 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Cdc7 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cdc7 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cdc7 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.