Cdc37 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401574-ACT

CDC37は、保存性の高いHSP90の共シャペロンであるCdc37をコードしており、キナーゼクライアントを足場として結び付け、そのフォールディング、安定化、および活性型シグナル伝達複合体への成熟を支えます。HSP90とプロテインキナーゼの相互作用を協調させることで、Cdc37はプロテオスタシスの維持に寄与し、MAPK/ERK、PI3K–AKT、細胞周期チェックポイント制御などの主要経路に影響を与えます。CDC37の発現や機能が変化すると、キナーゼネットワークのバランスが変わり、ストレス応答、増殖プログラム、プロテオームの安定性に影響を及ぼし得ます。これらの性質により、CDC37は臨床的な転帰を示唆することなく、がん遺伝子性シグナルやストレス適応型シグナルに対するシャペロン依存的制御を研究するための有用な結節点となります。

Cdc37 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CDC37の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Cdc37 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CDC37 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCDC37転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Cdc37の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCDC37遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCdc37依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCDC37発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCdc37経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。