Cdc37 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401574-ACT

CDC37 codifica a Cdc37, uma cocaperona conservada de HSP90 que atua como plataforma para quinases clientes e auxilia seu dobramento, estabilização e maturação em complexos de sinalização ativos. Ao coordenar as interações entre HSP90 e quinases, a Cdc37 ajuda a manter a proteostase e influencia vias-chave como MAPK/ERK, PI3K–AKT e o controle de checkpoints do ciclo celular. Alterações na expressão ou na função de CDC37 podem deslocar o equilíbrio das redes de quinases, afetando respostas ao estresse, programas de proliferação e a estabilidade do proteoma. Essas propriedades fazem de CDC37 um nó útil para estudar a regulação dependente de chaperonas da sinalização oncogênica e adaptativa ao estresse, sem implicar desfechos clínicos.

Cdc37 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CDC37 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Cdc37 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CDC37 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CDC37, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Cdc37. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CDC37 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Cdc37 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Cdc37 em células tumorais com expressão de CDC37 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.