Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Cdc25C Double Nickaseプラスミド (h): sc-400833-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Cdc25C Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Cdc25Cダブルニカースプラスミド（h）およびCdc25Cダブルニカースプラスミド（h2）は、CDC25Cを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Cdc25C 抗体 (H-6): sc-13138
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Cdc25C Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400833-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cdc25C Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400833-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDC25CはCdc25Cという二重特異性ホスファターゼをコードしており、阻害性リン酸基を除去することでCDK1–サイクリンB複合体を活性化し、G2/M移行と有糸分裂への進入を促進します。その活性は、ATR/CHK1やp53関連経路を含むチェックポイントシグナルによって厳密に制御されており、DNA損傷や複製ストレス下ではCdc25Cが抑制され、ゲノムの完全性が維持されます。CDC25Cの制御異常は有糸分裂のタイミングを乱し、染色体不安定性に寄与し得るため、がんにおける細胞周期制御破綻の研究において重要です。Cdc25Cは14-3-3による隔離や、リン酸化依存的な局在制御とも連動しており、チェックポイント適応や有糸分裂制御の機構を解析するための手がかりを提供します。
Cdc25C ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CDC25C 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CDC25C内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CDC25Cの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CDC25Cが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。