Cdc25B Double Nickaseプラスミド (h): sc-401457-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Cdc25B Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Cdc25Bダブルニカースプラスミド（h）およびCdc25Bダブルニカースプラスミド（h2）は、CDC25Bを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Cdc25B 抗体 (DCS-162): sc-56266
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Cdc25B Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401457-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cdc25B Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-401457-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDC25Bは、二重特異性ホスファターゼであるCdc25Bをコードしており、Cdc25BはCDK1およびCDK2から抑制性リン酸を除去することでサイクリン依存性キナーゼを活性化し、細胞周期の進行を促す主要な因子です。Cdc25BはG2/M移行を調整し、ATM/ATRなどのDNA損傷シグナル伝達経路の下流にあるチェックポイントからのシグナルを統合することで、有糸分裂への進入や複製ストレス応答の制御に関与します。その活性は、リン酸化依存的な細胞内局在とタンパク質安定性によって制御され、MAPKシグナル伝達やプロテアソーム分解と結び付いています。CDC25Bの発現や活性の破綻は、異常増殖、染色体不安定性、がん化に伴う細胞周期制御の破綻と関連しており、腫瘍生物学研究でしばしば注目される標的です。
Cdc25B ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CDC25B 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CDC25B内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CDC25Bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CDC25Bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。