CD8-α Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419576

Panoramica

Cd8a codifica per CD8-α, una glicoproteina transmembrana che forma omodimeri CD8αα o eterodimeri CD8αβ e funge da corecettore per il riconoscimento dei linfociti T ristretto dall’MHC di classe I. Associandosi a LCK e al complesso TCR/CD3, CD8-α potenzia la segnalazione dipendente dall’antigene, la formazione della sinapsi immunologica e i programmi di attivazione a valle che controllano la differenziazione citotossica, la produzione di citochine e le risposte di memoria effettrice. CD8-α contribuisce anche alla selezione timica e all’omeostasi periferica dei linfociti T CD8+, collegandosi così a vie che regolano lo sviluppo dei linfociti T e la sorveglianza immunitaria. Un’alterazione della funzione dipendente da CD8-α è rilevante in modelli di infezione, immunologia dei tumori e infiammazione autoimmune, in cui cambiamenti nella frequenza dei linfociti T CD8+ o nella forza della segnalazione possono rimodellare la patologia tissutale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CD8-α (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cd8a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cd8a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cd8a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CD8-α.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cd8a per lo studio della segnalazione di CD8-α, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cd8a critici per la funzione di CD8-α
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cd8a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CD8-α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CD8-α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cd8a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CD8-α Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CD8-α (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cd8a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cd8a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.