CD8-α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419576

Übersicht

Cd8a kodiert CD8-α, ein transmembranöses Glykoprotein, das CD8αα-Homodimere oder CD8αβ-Heterodimere bildet und als Korezeptor für die MHC-Klasse-I–restriktierte T‑Zell-Erkennung fungiert. Durch die Assoziation mit LCK sowie dem TCR/CD3-Komplex verstärkt CD8-α antigenabhängige Signalübertragung, die Bildung der immunologischen Synapse und nachgeschaltete Aktivierungsprogramme, die die zytotoxische Differenzierung, die Zytokinproduktion und Effektor‑Gedächtnisantworten steuern. CD8-α trägt außerdem zur thymischen Selektion und zur peripheren Homöostase von CD8+ T‑Zellen bei und ist damit mit Signalwegen verknüpft, die die T‑Zell-Entwicklung und die Immunüberwachung regulieren. Eine veränderte CD8-α‑abhängige Funktion ist relevant für Modelle von Infektionen, Tumorimmunologie und autoimmuner Entzündung, in denen Änderungen der Häufigkeit von CD8+ T‑Zellen oder der Signalstärke die Gewebepathologie neu gestalten können.

Das CD8-α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cd8a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cd8a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cd8a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CD8-α-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cd8a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CD8-α-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Cd8a-Exone abzielen, die für die CD8-α-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cd8a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CD8-α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CD8-α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cd8a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CD8-α HDR-Plasmid (m) und CD8-α HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cd8a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cd8a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.