CD74 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400279-ACT

ヒトCD74はインバリアント鎖（Ii）をコードしており、これはII型膜貫通タンパク質である。Iiは小胞体内でMHCクラスIIのα/βヘテロ二量体をシャペロンとして補助し、エンドソーム系コンパートメントを通る輸送を制御するとともに、プロテアーゼにより切断されてペプチドロードのためのCLIPを生成する。抗原処理・提示を制御することで、CD74は適応免疫の活性化や抗原特異的T細胞プライミングに影響し、さらにマクロファージ遊走阻止因子（MIF）などの細胞表面受容体との相互作用を介して、抗原提示細胞における細胞内シグナル伝達にも関与する。CD74の発現はB細胞、樹状細胞などのプロフェッショナル抗原提示細胞で顕著であり、エンドリソソーム系のプロテオスタシス、免疫監視、炎症応答を制御する経路との関連が示されている。CD74の発現異常は免疫介在性病態と関連づけられており、抗原提示や免疫シグナルが攪乱される血液悪性腫瘍や腫瘍微小環境の文脈で、しばしば研究対象となっている。

CD74 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CD74の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD74 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CD74 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCD74転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD74の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCD74遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD74依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCD74発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD74経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。