CD73 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400307-LAC

O NT5E humano codifica o CD73, uma ecto-5′-nucleotidase ancorada por glicosilfosfatidilinositol (GPI) que desfosforila o AMP extracelular em adenosina, moldando assim a sinalização purinérgica e a homeostase de nucleotídeos na superfície celular. A adenosina gerada pelo CD73 ativa vias de receptores de adenosina para regular a sinalização dependente de cAMP, a ativação de células imunes, a função de barreira endotelial e o tônus vascular, e atua de forma colaborativa com ectonucleotidases a montante, como a CD39, no catabolismo de ATP/ADP. A atividade de NT5E/CD73 é frequentemente examinada no contexto do remodelamento do ambiente extracelular de nucleotídeos associado à hipóxia e à inflamação, em que mudanças na disponibilidade de adenosina podem alterar o tráfego de leucócitos e as interações com o estroma. A expressão desregulada de NT5E tem sido associada a fenótipos imunorregulatórios em microambientes tumorais e à patobiologia vascular e inflamatória, sustentando seu uso como um nó mecanístico em estudos de respostas teciduais ao estresse.

As Partículas de Ativação Lentivirais CD73 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de NT5E numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais CD73 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição NT5E, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de CD73. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo NT5E e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.