CD73 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400307-ACT

NT5E は CD73（ecto-5′-ヌクレオチダーゼ）をコードしており、CD73 は GPI アンカー型の細胞外酵素として、細胞外 AMP をアデノシンと無機リン酸に加水分解し、組織微小環境におけるプリン作動性シグナル伝達を形成します。局所のアデノシン利用可能量を制御することで、CD73 は cAMP に連動する GPCR 経路を調節し、免疫細胞の活性化、血管透過性、ならびに血小板—内皮相互作用に影響を与えます。CD73 の活性は、炎症や低酸素に関連した応答の制御にも関与し、間質細胞および内皮細胞の状態を示すマーカーとして広く用いられています。NT5E/CD73 の発現または機能の破綻は、複数の疾患関連状況において、免疫調節の変化や異常な組織リモデリングと関連づけられています。

CD73 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NT5Eの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD73 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NT5E 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNT5E転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD73の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNT5E遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD73依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNT5E発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD73経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。