CD71/TFRC/Transferrin Receptor Double Nickaseプラスミド (h): sc-400310-NIC

TFRC（CD71）はトランスフェリン受容体をコードしており、トランスフェリンに結合した鉄のクラスリン依存性エンドサイトーシスを媒介し、細胞内の鉄恒常性を支えるII型膜糖タンパク質です。受容体の輸送とリサイクリングは、エンドソームの酸性化、鉄の放出、ならびにミトコンドリア呼吸、ヘム合成、DNA合成のためのリボヌクレオチドレダクターゼ活性など、鉄依存性プロセスの調整と連動しています。TFRCの発現は鉄応答配列（IRE）／鉄調節タンパク質（IRP）シグナルによって厳密に制御され、鉄需要の増大により増殖状態と相関することが多くあります。TFRCに関連した鉄取り扱いの破綻は、貧血、神経変性、感染生物学、腫瘍細胞代謝といった文脈で研究されており、鉄取り込みの変化が酸化ストレスや増殖プログラムに影響し得ます。

CD71/TFRC/Transferrin Receptor ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TFRC 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TFRC内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TFRCの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TFRCが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。