CD71/TFRC/Transferrin Receptor Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400310-ACT

TFRC codifica o CD71, o receptor de transferrina que medeia a ligação de alta afinidade e a endocitose dependente de clatrina da transferrina para entregar ferro às células, sustentando a síntese de heme, a respiração mitocondrial e a replicação do DNA. Após a acidificação endossomal e a libertação do ferro, a apotransferrina e o CD71 reciclam de volta para a membrana plasmática, acoplando a captação de ferro ao tráfego de membranas e às vias lisossomais/endossomais. A expressão de TFRC é rigorosamente regulada por elementos responsivos ao ferro e integra-se com a sinalização IRP/IRE, programas de proliferação conduzidos por MYC e redes responsivas à hipóxia que ajustam a necessidade celular de ferro. A atividade desregulada de TFRC e o manuseio do ferro são frequentemente estudados no metabolismo do cancro, na ativação de células imunitárias, na biologia relacionada com a anemia e em interações hospedeiro–patógeno que dependem da disponibilidade de ferro.

CD71/TFRC/Transferrin Receptor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TFRC sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD71/TFRC/Transferrin Receptor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TFRC em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TFRC, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD71/TFRC/Transferrin Receptor. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TFRC nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD71/TFRC/Transferrin Receptor no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD71/TFRC/Transferrin Receptor em células tumorais com expressão de TFRC silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.