CD55 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400738-ACT

CD55 (fator acelerador de decaimento, DAF) é uma proteína reguladora do complemento ancorada por glicosilfosfatidilinositol (GPI) que protege as células do hospedeiro contra lesão mediada pelo complemento ao acelerar o decaimento das convertases de C3/C5. Ao limitar a formação de componentes inflamatórios e líticos do complemento a jusante, o CD55 ajuda a moldar a sinalização imune inata na superfície celular e influencia as interações entre células imunes nos microambientes teciduais. Alterações na expressão de CD55 têm sido implicadas em atividade do complemento desregulada e em fenótipos de evasão imune observados em condições inflamatórias e em diversos contextos tumorais. Em modelos celulares humanos, modular CD55 oferece uma via viável para estudar o controle do complemento, o tráfego de proteínas de membrana e vias de reconhecimento imunológico.

CD55 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD55 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD55 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD55 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD55, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD55. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD55 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD55 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD55 em células tumorais com expressão de CD55 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.