Plasmide Double Nickase (h) CD5: sc-402309-NIC

CD5 est une glycoprotéine transmembranaire de type I exprimée principalement à la surface des lymphocytes T et d’un sous-ensemble de lymphocytes B, où elle agit comme récepteur immunomodulateur en ajustant les seuils de signalisation des récepteurs de l’antigène. Par ses interactions avec des composants du complexe TCR/CD3 ainsi qu’avec des phosphatases et des adaptateurs associés, CD5 participe à la régulation des cascades proximales de kinases à tyrosine, des flux de calcium et des programmes transcriptionnels en aval qui gouvernent l’activation, l’anergie et la survie. La signalisation médiée par CD5 influence la sélection des thymocytes et la tolérance périphérique, contribuant ainsi à l’homéostasie immunitaire lors des réponses inflammatoires. Une expression ou une fonction dérégulée de CD5 a été associée à des états d’activation lymphocytaire altérés dans l’auto-immunité et à des réseaux de signalisation aberrants dans les hémopathies malignes à cellules B, ce qui étaye son utilisation comme marqueur et nœud mécanistique dans la recherche en immunologie.

CD5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CD5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CD5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CD5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CD5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.