CD5 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-419560-ACT

マウスのCd5は、スカベンジャー受容体システインリッチ（SRCR）ファミリーに属する細胞表面糖タンパク質CD5をコードしており、T細胞および一部のB細胞における抗原受容体シグナル伝達を調節します。CD5は免疫シナプスの形成・組織化に関与し、T細胞受容体（TCR）下流および関連するSrcファミリーキナーゼ経路からのシグナルを統合することで活性化の閾値を調整し、サイトカイン産生やリンパ球の生存に影響を与えます。免疫恒常性と末梢トレランスの維持における役割を通じて、CD5の発現量やシグナル伝達の変化は、リンパ球活性化の制御不全や炎症性の免疫表現型と関連づけられてきました。そのためCd5は、マウスモデルにおいて、シグナル伝達のフィードバック、リンパ球分化、ならびに適応免疫応答を形作る機構を解析するための有用な分子学的手がかりとなります。

CD5 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Cd5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD5 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Cd5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCd5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCd5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCd5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。