CD47 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400508-LAC

O CD47 humano codifica uma proteína transmembranar da superfamília das imunoglobulinas que atua como um sinal-chave de reconhecimento de “próprio” por meio da sua interação com o SIRPα em células mieloides, modulando a fagocitose e a vigilância imunitária inata. O CD47 também se liga à trombospondina-1, influenciando a adesão e a migração celulares, a sinalização do óxido nítrico e respostas vasculares e inflamatórias. Por meio destas interações recetor–ligando, o CD47 integra a remodelação do citoesqueleto e a sinalização de sobrevivência com a homeostase dos tecidos. A expressão desregulada de CD47 tem sido associada a fenótipos de evasão imunitária tumoral e a alterações na biologia inflamatória e vascular, tornando-o relevante para estudos mecanísticos de regulação imunitária e de sinalização do microambiente.

As Partículas de Ativação Lentivirais CD47 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de CD47 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais CD47 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição CD47, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de CD47. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo CD47 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.