Plásmido Doble Nickase (h) CD47: sc-400508-NIC

CD47 codifica una proteína de membrana de la superfamilia de las inmunoglobulinas, expresada de forma amplia, que actúa como un regulador clave de la comunicación célula–célula y del reconocimiento de lo propio. Mediante su interacción con SIRPα en células mieloides, CD47 modula cascadas de señalización inhibitorias que influyen en la fagocitosis, la vigilancia inmunitaria innata y la homeostasis inflamatoria, además de interactuar con la trombospondina-1 para afectar respuestas de adhesión y migración. CD47 participa en procesos vinculados a la remodelación del citoesqueleto y a la señalización asociada a integrinas, con impacto en el tráfico de leucocitos y la remodelación tisular. La expresión y la señalización desreguladas de CD47 se han asociado con fenotipos de evasión inmunitaria en biología del cáncer y con mecanismos de depuración alterados en contextos de investigación de enfermedades hematológicas e inflamatorias.

CD47 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CD47 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CD47. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CD47. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CD47 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.