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CD40慢病毒激活颗粒(m) | sc-423444-LAC | 200 µl | $455.00 |
小鼠 Cd40 基因编码 CD40,它属于 TNF 受体超家族成员,在抗原呈递细胞上高表达,并通过 CD40–CD40L 相互作用协调免疫激活。CD40 信号可招募 TRAF 适配蛋白,进而激活 NF-κB、MAPK 以及 PI3K 依赖的程序,调控树突状细胞成熟、B 细胞增殖、生发中心反应、免疫球蛋白类别转换重组以及细胞因子产生。通过这些通路,CD40 影响 T 细胞启动与体液免疫,并参与与自身免疫、慢性炎症及肿瘤相关免疫调节有关的炎症回路。因此,在免疫失衡、淋巴系统生物学以及宿主—病原体应答等模型中,Cd40 表达的扰动一直是广泛研究的重点。
CD40 慢病毒激活颗粒(m)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 Cd40 表达。
CD40 慢病毒激活颗粒(m)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在Cd40转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性CD40表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 Cd40 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。