CD38 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-419548-ACT

マウスCd38はCD38をコードしており、CD38は多機能な細胞外酵素としてNAD⁺代謝を触媒し、環状ADPリボースやNAADPといったセカンドメッセンジャーを産生することで、細胞内Ca²⁺動員を制御する。CD38活性は免疫細胞の活性化、分化、接着を方向づけ、さらにNAD⁺依存性シグナル伝達の調節を介して代謝およびレドックス恒常性にも寄与する。造血系および間質系の区画では、CD38に連結した経路がプリン作動性シグナル、カルシウム依存性の転写プログラム、炎症性サイトカインのネットワークと交差する。CD38の発現量や酵素機能の変化は、マウス疾患モデルにおいて免疫調節異常、代謝リモデリング、ならびに加齢に伴うNAD⁺回転の変化を示す分子学的指標として広く用いられている。

CD38 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Cd38の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD38 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Cd38 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCd38転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD38の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCd38遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD38依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCd38発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD38経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。