Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
CD35 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401210
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD35 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico CD35, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD35 Antibody (E-11): sc-7308
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD35 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-401210 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
CR1 codifica CD35, un recettore del complemento di membrana che lega le opsonine C3b/C4b e favorisce la rimozione dei complessi immuni, regolando al contempo l’attivazione del complemento sulla superficie cellulare. CD35 partecipa al riconoscimento immunitario innato e collega il complemento alle risposte adattative modulando la gestione dell’antigene e la segnalazione nelle cellule B; è espresso su eritrociti, leucociti e cellule dendritiche follicolari. Attraverso il controllo dell’amplificazione della cascata del complemento e della captazione fagocitica, CR1 influenza l’omeostasi infiammatoria e la suscettibilità al danno tissutale mediato dal complemento. La variazione genetica e l’alterata espressione di CR1/CD35 sono state associate a disregolazione immunitaria e disturbi infiammatori, e sono state studiate anche in contesti quali la neuroinfiammazione e le interazioni ospite–patogeno nelle malattie infettive.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CD35 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CR1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CR1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CR1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CD35.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CR1 per lo studio della segnalazione di CD35, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni CR1 critici per la funzione di CD35
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CR1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal CD35 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CD35 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CR1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal CD35 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CD35 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CR1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CR1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.