CD35 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401210-ACT

補体受容体1（CR1、別名CD35）は、赤血球、白血球、濾胞性樹状細胞に発現する細胞表面糖タンパク質であり、補体オプソニンであるC3bおよびC4bに結合して免疫複合体の除去を促進し、補体系カスケードの増幅を制御する。CD35はC3/C5コンバターゼの崩壊を促進し、さらに第I因子によるC3b/C4b切断の補因子として働くことで、炎症応答における自然免疫シグナル伝達、貪食、抗原の取り扱いを調整する。CR1の機能は古典経路および代替経路の補体経路と交差し、宿主防御、免疫複合体の輸送、ならびにFc受容体介在性プロセスとのクロストークに影響を及ぼす。CR1の遺伝的多型や発現量の変動は、免疫複合体駆動性炎症や、補体に関連する神経炎症性・血液学的表現型における感受性および病態生物学の変化と関連づけられており、機序解明の研究標的としての有用性を支持している。

CD35 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CR1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD35 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CR1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCR1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD35の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCR1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD35依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCR1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD35経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。