CD33 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401011-ACT

ヒトCD33は、シアル酸結合性免疫グロブリン様レクチン（Siglec-3）をコードしており、主として骨髄系細胞系譜に発現します。CD33は細胞活性化を抑制する阻害性受容体として機能します。免疫受容体チロシン阻害モチーフ（ITIM）を介したシグナル伝達と、SHP-1/2などのホスファターゼのリクルートにより、CD33は自然免疫の活性化閾値、サイトカイン応答、ならびに貪食プログラムを調節します。CD33はシアル化糖鎖の認識に関与し、骨髄系分化、抗原の取り扱い、炎症性シグナル伝達を制御する経路に影響を与えます。CD33の発現やシグナル伝達の変化は、骨髄系悪性腫瘍や神経炎症の文脈と関連づけられており、造血・免疫生物学研究におけるマーカーおよび機構的ハブとしての利用を裏づけています。

CD33 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CD33の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD33 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CD33 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCD33転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD33の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCD33遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD33依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCD33発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD33経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。