CD30 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402068-ACT

TNFRSF8 codifica o CD30, um membro da superfamília de receptores de TNF expresso em linfócitos ativados e implicado na regulação da ativação, proliferação e sobrevivência celular. A sinalização do CD30 recruta proteínas adaptadoras para modular a atividade das vias NF-κB e MAPK, moldando programas transcricionais ligados a respostas imunes e ao estresse celular. A expressão e a sinalização desreguladas de CD30 são estudadas no contexto de neoplasias linfoides e de microambientes inflamatórios, nos quais alterações em sinais mediados por receptores podem influenciar estados de crescimento e diferenciação. Como receptor de superfície com expressão induzível, o CD30 constitui um alvo acessível para dissecar a regulação transcricional dirigida por receptores e a remodelação de redes a jusante em células humanas.

CD30 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TNFRSF8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD30 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TNFRSF8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TNFRSF8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD30. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TNFRSF8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD30 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD30 em células tumorais com expressão de TNFRSF8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.