CD3-ζ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400591-ACT

CD247 codifica a cadeia CD3-zeta (CD3ζ), um componente essencial do complexo TCR–CD3 do receptor de células T, que contém motivos de ativação baseados em tirosina (ITAMs) necessários para a sinalização induzida por antígeno. Após o engajamento do TCR, a fosforilação de CD3ζ favorece o recrutamento de ZAP70 e a propagação do sinal por meio dos signalossomos LAT/SLP-76, ativando as vias downstream de MAPK, NF-κB e NFAT, o que molda a ativação das células T, a produção de citocinas e a função efetora citotóxica. Alterações na expressão de CD247 ou na competência de sinalização têm sido associadas à desregulação imune e a respostas linfocitárias comprometidas, incluindo disfunção de células T associada a tumores e desequilíbrio de sinalização relacionado à autoimunidade. Como adaptador proximal na imunidade adaptativa, CD3ζ é frequentemente estudado no desenvolvimento de células T, nos limiares de ativação e na sinalização de receptores engenheirados.

CD3-ζ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD247 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD3-ζ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD247 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD247, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD3-ζ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD247 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD3-ζ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD3-ζ em células tumorais com expressão de CD247 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.