CD3-γ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402537-ACT

CD3G codifica o CD3-γ, um componente essencial do complexo receptor de células T (TCR)-CD3, que conecta o reconhecimento de antígenos à transdução de sinais intracelulares. Ao se montar com CD3δ, CD3ε e CD3ζ, o CD3-γ ajuda a iniciar cascatas de sinalização dependentes de fosforilação envolvendo LCK, ZAP70 e, a jusante, as vias MAPK, NF-κB e NFAT, que regulam a ativação, a proliferação e a produção de citocinas pelas células T. Alterações na expressão ou na função de CD3G podem perturbar o desenvolvimento de timócitos e os limiares de sinalização do TCR, associando esse gene a fenótipos de desregulação imune e a mecanismos relacionados à imunodeficiência. Como uma subunidade central do complexo TCR, o CD3-γ é amplamente estudado na biologia de linfócitos, na sinalização imune adaptativa e no crosstalk entre vias que molda respostas a estímulos inflamatórios.

CD3-γ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD3G sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD3-γ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD3G em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD3G, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD3-γ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD3G nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD3-γ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD3-γ em células tumorais com expressão de CD3G silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.