Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) CD3-δ: sc-401519-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CD3-δ consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CD3-δ (h) y el plásmido de doble nickasa CD3-δ (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CD3D. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CD3-δ Anticuerpo (F-1): sc-137137
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CD3-δ | sc-401519-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CD3-δ | sc-401519-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD3D codifica CD3-δ, un componente esencial del complejo del receptor de células T (TCR)–CD3, que acopla el reconocimiento del antígeno con la señalización intracelular. CD3-δ participa en el ensamblaje y la expresión en la superficie del complejo TCR y transmite señales de activación a través de motivos de activación basados en tirosina del inmunorreceptor (ITAM) en las cadenas CD3 asociadas, activando la señalización mediada por LCK/ZAP70 y las vías downstream MAPK, NF-κB y NFAT. Mediante estos procesos, CD3-δ contribuye al desarrollo de los timocitos, la activación de las células T y la homeostasis inmunitaria adaptativa. La alteración de la función de CD3D es relevante en estudios de inmunodeficiencia de células T, señalización inmunitaria aberrante y mecanismos de inmuno-oncología en los que la intensidad y la composición de la señalización del TCR determinan los fenotipos celulares.
CD3-δ El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CD3D en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CD3D. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CD3D. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CD3D alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.