CD2AP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401218-ACT

O CD2AP humano codifica a proteína associada ao CD2, um adaptador/andaime que conecta receptores de membrana ao citoesqueleto de actina e coordena a endocitose, o tráfego vesicular e a transdução de sinal. O CD2AP participa da organização do diafragma de fenda e do citoesqueleto dos podócitos, da internalização de receptores e da estabilidade de junções por meio de interações com nefrina, c-Cbl e complexos reguladores de actina, influenciando a PI3K/AKT e vias relacionadas que controlam a sobrevivência e a morfologia celular. Alterações na expressão ou na função de CD2AP têm sido associadas a defeitos na barreira de filtração glomerular, doença renal proteinúrica e fenótipos mais amplos ligados à desregulação da dinâmica do citoesqueleto e da sinalização em células imunes. Assim, este gene é amplamente estudado em modelos de biologia de podócitos, tráfego de membranas e redes de sinalização acionadas por receptores.

CD2AP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD2AP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD2AP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD2AP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD2AP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD2AP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD2AP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD2AP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD2AP em células tumorais com expressão de CD2AP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.