CD26 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400862-NIC

DPP4はCD26をコードしており、CD26は細胞表面に存在するセリン型エキソペプチダーゼで、N末端から2番目にプロリンまたはアラニンをもつペプチドのN末端ジペプチドを切り出します。これにより、ケモカイン、インクレチン、その他の生理活性ペプチドの生体内利用能やシグナルが届く範囲が調節されます。酵素活性に加えて、CD26はアデノシンデアミナーゼや細胞外マトリックス成分との相互作用を通じて免疫調節にも関与し、T細胞の活性化、接着、遊走に影響を与えます。CD26は炎症時の細胞動員、糖恒常性、細胞外でのプロテオリシスを制御する経路に組み込まれており、その発現や活性は免疫介在性疾患、代謝異常、腫瘍関連免疫微小環境と関連しています。膜局在と幅広い基質レパートリーをもつことから、DPP4は細胞間コミュニケーションやプロテアーゼ制御性シグナル伝達を研究する上で有用なハブとなります。

CD26 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における DPP4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、DPP4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、DPP4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、DPP4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。