CD24 Plasmide Double Nickase (h): sc-418762-NIC

CD24 codifica una proteina di membrana espressa sulla superficie cellulare, fortemente glicosilata e ancorata tramite GPI, che agisce da modulatore delle interazioni cellula–cellula e cellula–matrice e contribuisce a regolare finemente la segnalazione immunitaria e infiammatoria. CD24 può controllare la maturazione delle cellule B e le vie di risposta all’antigene, e partecipa a segnali inibitori attraverso interazioni con recettori Siglec, modellando l’attivazione dell’immunità innata e la produzione di citochine. In contesti epiteliali ed ematopoietici, un’alterata espressione di CD24 è associata a cambiamenti nei programmi di adesione, migrazione e differenziamento, collegandola a processi come comportamenti simili alla metastasi e il crosstalk con il microambiente tumorale in molteplici modelli di cancro. CD24 è inoltre utilizzato come marcatore di linea e associato a cellule staminali/progenitrici in diversi tessuti, a supporto di studi meccanicistici sull’eterogeneità cellulare e sulle transizioni di stato.

CD24 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CD24 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CD24. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CD24. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CD24 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.